La escena sucede en el Cuarto del Príncipe, una sala del Alcázar de Madrid, el antiguo palacio de los reyes de España.
En esa sala, Velázquez tenía su estudio y pintaba un retrato de los reyes Felipe Cuarto y Mariana de Austria.
En ese momento, la infanta Margarita entra en la sala.
El cuadro es un retrato de conjunto en el que aparecen varios personajes:
- La infanta Margarita, hija de los reyes, está en el centro.
- A ambos lados de la infanta Margarita, están sus 2 meninas o sirvientas: Isabel de Velasco está de pie y María Agustina Sarmiento está arrodillada mientras le ofrece una jarrita de agua a Margarita.
- En la esquina derecha están los bufones Mari Bárbola y Nicolasito Pertusato junto a un gran perro.
- Detrás están 2 guardadamas, un antiguo oficio de acompañamiento de la reina y la infanta que ya no existe. La mujer es Marcela de Ulloa.
- Al fondo, en la puerta está José Nieto, aposentador de la reina. Él organizaba las habitaciones de palacio.
- Por último, a la izquierda, Velázquez se retrata a sí mismo, mientras pinta un gran cuadro y mira a los espectadores.
Al fondo, al lado de la puerta, hay un espejo en el que se ven reflejados los reyes, que miran la escena mientras Velázquez les retrata.