Leonardo hizo tres cartones (dibujos a escala real) con diversas propuestas para la composición de su Santa Ana. La obra es uno de los pocos testimonios conservados del segundo, ideado por el maestro antes de su partida a Milán en 1508 y muy próximo a la versión definitiva, pero con la escena invertida. Otra versión de este cuadro se perdió durante la Segunda Guerra Mundial.