En el centro, la Virgen, en actitud de oración, rodeada de los doce apóstoles; detrás, tres figuras femeninas. En primer término, a la izquierda, San Pedro con las llaves en el suelo y el libro; a la derecha San Juan. En lo alto, el Espíritu Santo en forma de paloma y una serie de querubines, bajo un cortinaje.

Según la narración de San Lucas, autor de los Hechos de los Apóstoles, estando éstos reunidos, sobrevino de repente un ruido del cielo como del viento impetuoso que soplaba, que llenó toda la casa, y aparecieron una especie de lenguas de fuego que se asentaron sobre cada uno de ellos; inmediatamente, quedaron llenos del Espíritu Santo y comenzaron a hablar en diversas lenguas las palabras que el Espíritu Santo ponía en sus bocas.

Palomino, que además de pintor era un profundo conocedor de los libros sagrados, supo reflejar en su representación de este fundamental acontecimiento la sensación de turbulencia creada por la irrupción de la blanca paloma, símbolo del Espíritu Santo, estableciendo además un contraste entre las actitudes de los Apóstoles, sorprendidos e incluso atemorizados ante lo desconocido, y la serenidad de la Madre de Dios, cuyo corazón intuía los designios divinos. Los contrastes luminosos, acentuados por el cortinaje dispuesto en pabellón que cierra la composición por arriba, conjugados con una técnica empastada y vibrante, contribuyen a lograr los efectos deseados.