Tras el impacto provocado por su cuadro Doña Isabel la Católica dictando su testamento (P4625), Rosales volvió a abrir con este pequeño lienzo nuevos horizontes en la evolución de la pintura española de historia, desafiando la moda de los grandes formatos impuesta en los certámenes oficiales para adaptarlos a la demanda de la clientela privada. Así, comenzó a pintar cuadros de argumento histórico con tamaño de gabinete para la decoración de las residencias de la alta sociedad de su tiempo, pretendiendo encontrar así para su precaria economía una fuente de ingresos segura al dedicarse a este género, en el que había conseguido su consagración pública años atrás.

Este soberbio cuadro, tan pequeño de tamaño como grande ejecución, representa el momento en que el adolescente Juan de Austria (1545-1578), hijo natural del viudo emperador Carlos V (1500-1558) y Bárbara Blomberg (1527-1597), es conducido a presencia de su ya anciano y enfermo padre en su retiro del Monasterio de Yuste, donde se recluyó tras abdicar a la corona en favor de su legítimo heredero, Felipe II. Éste reconoció a su hermanastro, que se revelaría más tarde como gran estratega al frente de la flota española en la batalla de Lepanto (1571). Su identidad fue mantenida durante muchos años en secreto, y en sus últimos años, el emperador ideó distintas excusas para verle con frecuencia, ocultando su verdadera condición. Junto a un gran ventanal y ante una chimenea está sentado Carlos V, prácticamente inválido por sus ataques de gota, por lo que lleva cubiertas sus piernas con una manta y las reposa sobre un cojín y una alfombra, acompañado de su perro mastín y dos frailes jerónimos del Monasterio. En el extremo opuesto de la sala, y ante los nobles de su corte, el joven y tímido Jeromín, como se le llamaba familiarmente, vestido de intenso azul, es presentado por su tutor don Luis de Quijada a su padre, cuya imponente presencia intimida al muchacho, ignorante de su íntimo y regio parentesco.

Además de la extraordinaria riqueza plástica de su técnica, de toque breve y empastado, aplicado a grandes manchas sin desatender la justeza de su dibujo riguroso y un recio sentido del volumen en el modelado de las figuras, el cuadro causó gran novedad en su tiempo precisamente por su formato, absolutamente inusual hasta entonces en la pintura histórica, sin disminuir por ello su rotunda monumentalidad ni la gravedad trascendente que la escena exigía. Así, Rosales sitúa con gran habilidad a los personajes que asisten a la audiencia en el espacio interior de la estancia, espléndidamente sugerida a través del tratamiento atmosférico de la luz y una pincelada suelta y enérgica. Su perspectiva espacial procede, como señaló Gállego, de la pintura francesa, de obras como la Muerte del duque de Guisa de Delaroche (Chantilly, Musée Condé), con la que guarda estrechas semejanzas formales, tanto en su ambientación escenográfica como en la disposición de los personajes, al desplazar los puntos de atención dramática del argumento a los extremos de la composición, dando testimonio una vez más de su sentido sobrio del color, no obstante de enorme brillantez y audacia, al conseguir armonizar el azul intenso del traje del adolescente con el resto de la gama cromática del cuadro, mucho más contenida (Texto extractado de Díez, J. L. en: El siglo XIX en el Prado, Museo Nacional del Prado, 2007, pp. 216-218).